علم برای آنالیز دقیق، از انتخاب دستگاه تا نتیجه‌ای قابل اتکا

Procedure A، B و C یعنی چه؟

سه مرحله‌ی پشت‌سرهم در USP 467: Procedure A غربالگری و limit test روی ستون G43؛ اگر پیکی بالاتر از حد مجاز دیده شد، Procedure B روی ستون با فاز متفاوت (WAX، G16) هویت آن را تأیید می‌کند؛ اگر بالاتر از حد تأیید شد، Procedure C مقدار همان solvent را کمی اندازه‌گیری می‌کند (quantitation)

Procedure A (ستون G43)

ستون capillary نوع 624 (G43)، 30 m × 0.32 mm × 1.8 µm

Carrier gas

He، constant flow برابر 2.2 mL/min

Inlet

SSL، 140 °C، split 10:1

Oven

40 °C (20 min) → 10 °C/min → 240 °C (20 min)

FID

250 °C

Headspace

oven 80 °C، equilibration 45 min با shaking، manifold 90 °C، transfer line 105 °C، loop 1 mL، pressurization 1 bar

Procedure B (ستون G16)

تأیید روی ستون WAX، 30 m × 0.32 mm × 0.25 µm؛ oven: 50 °C (20 min) → 6 °C/min → 165 °C (20 min)

Procedure C

quantitation کمی solventی که تأیید شده؛ طبق منبع بررسی‌شده روی همان ستون G43 انجام می‌شود. جزئیات نمونه‌سازی در متن رسمی USP است

Diluent

آب؛ stock Class 1 ابتدا در DMSO و سپس در آب

Class 1، 2 و 3

Class 1: solventهایی که باید از آن‌ها پرهیز شود (benzene، carbon tetrachloride، 1,2-dichloroethane، 1,1-dichloroethene، 1,1,1-trichloroethane)؛ Class 2: با حد مجاز محدود؛ Class 3: سمیت کم

شرایط بالا (ستون و برنامه‌ی دما) از یک application note شرکت Thermo Fisher آمده است. split ratio، زمان equilibration و روش آماده‌سازی نمونه را با متن رسمی USP 467 و آخرین ویرایش ICH Q3C (حدود مجاز) تطبیق دهید.

Analytes

benzene، toluene، ethylbenzene، o/m/p-xylene و ترکیبات halogenated

Detector

PID برای aromatics (HECD به BTEX پاسخ نمی‌دهد)

ستون اصلی

60 m × 0.75 mm VOCOL، film 1.5 µm

ستون confirmation

60 m × 0.53 mm SPB-624، film 3.0 µm؛ تأیید با GC/MS هم مجاز است

Oven

10 °C (8 min) → 4 °C/min → 180 °C، نگه‌داشتن تا elution کامل

Carrier / make-up

He با 6 mL/min؛ make-up He با 24 mL/min قبل از PID

Retention (VOCOL)

benzene 26.10 · toluene 31.95 · ethylbenzene 36.72 · m/p-xylene 36.98 · o-xylene 38.39 min

Calibration

حداقل 5 غلظت؛ internal standard پیشنهادی: fluorobenzene برای PID

Direct injection فقط وقتی مجاز است که غلظت بیش از 10,000 µg/L انتظار برود. این ستون‌ها در متن قدیمی (Rev. 2) آمده‌اند؛ امروزه ستون‌های 624-type هم رایج‌اند.

Standard

مخلوط 37 جزئی FAME از C4 تا C24 در iso-octane

ستون

DB-FastFAME (modified cyanopropyl): 30 m × 0.25 mm × 0.25 µm، یا 20 m × 0.18 mm × 0.20 µm

Inlet

split/splitless، 220 °C، split از 20:1 تا 100:1

Carrier

He، constant pressure؛ 27 psi برای ستون 30 m

Oven (30 m)

60 °C (0.49 min) → 300 °C/min → 175 °C (0.49 min) → 15 °C/min → 210 °C (2.5 min) → 14.5 °C/min → 240 °C (3 min)

Run time

حدود 9.5 min برای ستون 30 m (کمتر از 7 min برای 20 m)

FID

240 °C؛ H₂ 30 mL/min، air 400 mL/min، make-up N₂ 20 mL/min

برای جداسازی کامل isomerهای cis/trans از ستون biscyanopropyl با طول 100 m استفاده می‌شود (مرجع رایج: AOCS Ce 1h-05) و زمان آنالیز طولانی‌تر است. نوع ستون و oven program را از استاندارد مربوط بگیرید.

Analytes

aldrin، BHCها (α, β, δ, γ)، chlordane، DDD/DDE/DDT، dieldrin، endosulfan I/II و sulfate، endrin و aldehyde/ketone، heptachlor و epoxide، hexachlorobenzene، methoxychlor، toxaphene و دیگر

Detector

ECD (ELCD هم ممکن است)

جفت ستون 1 (dual-ستون)

DB-5 (30 m × 0.53 mm، film 1.5 µm) + DB-1701 (30 m × 0.53 mm، film 1.0 µm)

Injector

250 °C در dual-ستون (205 °C اگر breakdown رخ دهد)

Oven (نمونه)

140 °C (2 min) → 2.8 °C/min → 270 °C (1 min)

Gas

He به‌عنوان carrier؛ make-up: argon/methane یا N₂

Surrogates

decachlorobiphenyl و tetrachloro-m-xylene

Extraction

آب: methylene chloride در pH خنثی؛ جامد: hexane-acetone 1:1 یا methylene chloride-acetone 1:1؛ extract در hexane یا isooctane

معیارهای QC: RSD ضرایب calibration ≤ 20٪؛ verification در ±15٪؛ breakdown هر یک از DDT و endrin بیش از 15٪ نیاز به اقدام اصلاحی دارد.

ستون

Rtx-1301 (فاز معادل G43، یعنی نوع 624)، 30 m × 0.53 mm × 3.0 µm

Oven

50 °C (5 min) → 10 °C/min → 200 °C (4 min)؛ run time 24 min

Inlet

split 5:1، 0.5 µL، 210 °C؛ constant flow با linear velocity برابر 34 cm/s

FID

280 °C؛ H₂ 30 mL/min، air 350 mL/min

Internal standard

acetonitrile 0.4٪ v/v

Calibration

single-point با نسبت area هر alcohol به acetonitrile؛ linearity با 7 سطح از 0.001٪ تا 1.0٪ v/v

حد methanol

طبق FDA guidance: 630 ppm

معیارهای پذیرش همین روش در بخش validation آمده است. وضعیت نسخه‌ی رسمی منتشرشده‌ی LIB را در سایت FDA بررسی کنید.

Scope

محصولات نفتی با final boiling point حداکثر 538 °C (1000 °F)؛ range جوش باید بیش از 55.5 °C باشد

استثنا

gasoline و اجزای آن (برای آن‌ها D3710)

Procedure A

ستون packed یا capillary؛ run time از 14 تا 60 min

Procedure B

فقط سه ستون capillary مشخص، بدون dilution، حدود 8 min؛ تست‌شده با biodiesel blendهای B5، B10 و B20

Detector / inlet

FID؛ cool on-ستون (در application note مرجع)

Calibration

مخلوط n-paraffin از C5 تا C44 با 1٪ wt هر کدام در CS₂

Sample

dilution با CS₂ قبل از injection

نتایج معادل true boiling point distillation (D2892) است و با D86 یا D1160 معادل نیست. ستون، oven program و محاسبات را از متن رسمی ASTM بگیرید.

Scope

تعیین composition گاز طبیعی و mixtureهای مشابه در بازه‌ی اجزایی که خود استاندارد تعریف کرده است

کاربرد

محاسبه‌ی heating value و relative density، یا پایش اجزا

نمونه‌ی configuration

دو TCD، سه valve و شش packed ستون (مثال از product sheet شرکت Shimadzu)

Components (mol٪)

He و H₂ از 0.01 تا 10؛ O₂ تا 20؛ N₂ تا 50؛ CH₄ از 20 تا 100؛ CO₂ تا 20؛ C₂H₆ و C₃H₈ تا 10؛ n-C₄ و n-C₅ تا 2؛ i-C₄ و i-C₅ تا 10؛ C6+ از 0.01 تا 0.5

Run time

حدود 20 تا 23 min

بازه‌ی components در این کارت مربوط به آنالایزر مثال است و بازه‌ی رسمی در جدول داخل متن استاندارد آمده است. D1945 را می‌توان برای lean gas بدون hexanes کوتاه کرد.

هدف

اندازه‌گیری EPA (eicosapentaenoic acid، C20:5 n-3) و DHA (docosahexaenoic acid، C22:6 n-3) پس از تبدیل چربی به متیل‌استر (FAME)

آماده‌سازی

تبدیل triglyceride یا ethyl ester به FAME با روش رسمی مرجع؛ جزئیات واکنش را از متن استاندارد انتخابی بگیرید

ستون

Agilent J&W DB-FATWAX Ultra Inert (فاز WAX)، 30 m × 0.25 mm × 0.25 µm

Carrier gas

He، سرعت 30 cm/s، constant flow

Inlet

split/splitless، 250 °C، split 100:1، حجم تزریق 1 µL؛ liner Ultra Inert با glass wool

Oven (نمونه‌ی menhaden oil)

180 °C (2 min) → 2 °C/min → 210 °C، نگه‌داشتن 35 min

FID

280 °C؛ H₂ 40 mL/min، air 400 mL/min، make-up 25 mL/min

ترتیب elution (نمونه)

... C18:3 n-3 (ALA)، C20:4 n-6 (ARA)، C20:5 n-3 (EPA)، C22:5 n-3 (DPA)، C22:6 n-3 (DHA)؛ DHA از C24:0 و C24:1 baseline جدا می‌شود

استاندارد در منبع

مخلوط PUFA No. 3 (Menhaden oil) با رقیق‌سازی 100 برابر در acetone

کمی‌سازی

با internal standard؛ در Ph. Eur. 2.4.29 معمولاً متیل‌استر C23:0 (methyl tricosanoate) به‌کار می‌رود. نوع internal standard و ضریب‌های اصلاح را از متن رسمی روش خود بگیرید

شرایط بالا از application note سازنده برای جداسازی پروفایل اسیدهای چرب omega-3 و omega-6 آمده است و خودِ روش رسمی assay نیست. برای گزارش مقدار EPA و DHA (مثلاً mg در هر گرم) از روش رسمی انتخابی (Ph. Eur. 2.4.29، AOCS Ce 1b-89 یا روش مورد قبول GOED) و آخرین ویرایش آن استفاده کنید.

ستون

5٪ phenyl (HP-5MS یا معادل)، 30 m × 0.25 mm × 0.25 µm

Carrier

He، حدود 1.0 mL/min

Oven

60 °C → 3 °C/min → 240 °C (برنامه‌ی نمونه)

MS

EI در 70 eV، Scan حدود m/z 40 تا 450

Identification

مقایسه‌ی طیف با کتابخانه‌ی NIST به‌همراه Retention Index خطی با n-alkane series

Sample

dilution در hexane یا dichloromethane؛ یا SPME / headspace

این کارت یک شرایط نمونه‌ی رایج است و از یک استاندارد رسمی نیامده است. شناسایی فقط با library match کافی نیست؛ RI و در صورت امکان standard اصلی را هم بسنجید.

Extraction (EN 15662)

10 g نمونه + 10 mL acetonitrile؛ سپس 4 g MgSO₄، 1 g NaCl، 1 g trisodium citrate dihydrate و 0.5 g disodium hydrogencitrate sesquihydrate

Clean-up

dispersive SPE با MgSO₄ و PSA؛ C18 یا GCB در صورت نیاز (مقدار طبق kit)

LC (نمونه‌ی رایج)

C18 با ID 2.1 mm؛ mobile phase آب و methanol با افزودنی ammonium formate و formic acid؛ gradient

MS

ESI مثبت و منفی، triple quadrupole در MRM با دو transition برای هر analyte

Identification

دو product ion؛ ion ratio در ±30٪ نسبی؛ retention time در ±0.1 min

Matrix effect

اگر بیش از 20٪ باشد، matrix-matched calibration یا isotope-labeled internal standard

بخش LC فقط نمونه‌ی رایج است و در هر آزمایشگاه برای pesticide list و matrix بهینه می‌شود. معیارهای کامل SANTE در بخش validation آمده است.

Scope

ترکیبات volatile در ماتریس‌های پسماند جامد، خاک، آب و نمونه‌های مشابه؛ برای بیشتر نمونه‌ها صرف‌نظر از میزان آب قابل استفاده است

Sample introduction

purge-and-trap: Method 5030 برای آب و Method 5035 برای خاک و جامد (رایج‌ترین مسیر). گزینه‌های دیگر: static headspace (5021)، direct injection با رقیق‌سازی (برای waste oil)، و چند روش دیگر

ستون‌های پیشنهادی در متن

30 m × 0.25 mm × 1.4 µm نوع DB-624 یا VOCOL؛ 20 m × 0.18 mm × 1 µm نوع DB-VRX؛ 60 m × 0.32 mm × 1.5 یا 1.8 µm نوع Rtx-Volatiles

نمونه‌ی شرایط GC (DB-VRX)

ستون 20 m × 0.18 mm × 1.0 µm؛ He با 0.9 mL/min؛ oven: 30 °C (3 min) → 10 °C/min → 100 °C → 20 °C/min → 240 °C (1 min)؛ inlet و transfer line: 250 °C؛ split 50:1

MS

EI، 70 eV (nominal)، Scan از m/z 35 تا 270؛ حداقل 5 spectrum روی هر peak (ترجیحاً 10 یا بیشتر)

Tuning

قبل از calibration اولیه باید tune با 4-bromofluorobenzene (BFB) طبق معیار جدول متن روش، یا مشخصات سازنده‌ی دستگاه، تأیید شود

Internal standards پیشنهادی

fluorobenzene، chlorobenzene-d5 و 1,4-dichlorobenzene-d4

Surrogates پیشنهادی

toluene-d8، 4-bromofluorobenzene و 1,2-dichloroethane-d4؛ بازیابی پیشنهادی برای نمونه‌های واقعی 70 تا 130٪

Calibration

حداقل 5 غلظت (6 غلظت برای مدل درجه دو)؛ RSD ضریب پاسخ هر analyte ≤ 20٪ برای استفاده از average response factor

CCV

در ابتدای هر دوره‌ی 12 ساعته، پیش از نمونه‌ها؛ انحراف هر analyte در ±20٪ و سپس یک blank

روش به‌طور عمدی انعطاف دارد؛ ستون، oven program و روش آماده‌سازی را آزمایشگاه بر اساس لیست analyteها انتخاب و validate می‌کند. برای آب آشامیدنی معمولاً از روش‌های سری EPA 524 استفاده می‌شود.

Scope

ترکیبات semivolatile (خنثی، اسیدی و بازی) که در methylene chloride یا حلال مناسب حل می‌شوند، در عصاره‌ی خاک، پسماند، آب و نمونه‌های هوا

ستون

fused-silica با فاز 5% phenyl-methylpolysiloxane یا معادل؛ 30 m × 0.25 mm (یا 0.32 mm) با film برابر 0.25، 0.5 یا 1 µm

Oven (نمونه)

40 °C (4 min) → 10 °C/min → 320 °C؛ نگه‌داشتن تا 2 min پس از elution بنزو[g,h,i]پریلن (benzo[g,h,i]perylene)

Inlet / transfer line

inlet: 225 تا 300 °C، split/splitless؛ transfer line: 250 تا 300 °C؛ حجم تزریق 0.5 تا 2 µL

Carrier gas

He با 30 cm/s یا H₂ با 50 cm/s

MS

EI، 70 eV (nominal)، Scan از m/z 35 تا 500

Tuning

decafluorotriphenylphosphine (DFTPP)؛ در tune check همراه با DDT، pentachlorophenol و benzidine: breakdown DDT نباید از 20٪ بیشتر شود و tailing برای benzidine و pentachlorophenol نباید بیش از 2 باشد

Internal standards

1,4-dichlorobenzene-d4، naphthalene-d8، acenaphthene-d10، phenanthrene-d10، chrysene-d12 و perylene-d12

Surrogates

phenol-d6، 2-fluorophenol، 2,4,6-tribromophenol، nitrobenzene-d5، 2-fluorobiphenyl و p-terphenyl-d14

Calibration و CCV

حداقل 5 غلظت، RSD ≤ 20٪؛ CCV در ابتدای هر دوره‌ی 12 ساعته با انحراف ≤ 20٪

روش‌های extraction مرتبط

آب: 3510، 3511، 3520، 3535؛ خاک و رسوب: 3540، 3541، 3545، 3546، 3550، 3561؛ پسماند: همان‌ها و 3580؛ هوا: 3542

این روش با Method 8081B (GC-ECD) و Method 8310 (HPLC) هم‌پوشانی دارد: برای سطح‌های بسیار پایین یا شناسایی قطعی، GC-MS یا GC-MS/MS انتخاب می‌شود.

Analytes

NDMA (N-nitrosodimethylamine) و NDEA (N-nitrosodiethylamine) در drug substance و drug product والسارتان

دستگاه

GC با MS تک‌کوادروپل و headspace autosampler (در سند: Agilent 7890B / 5977A / 7697A)

ستون

DB-1701، 30 m × 0.25 mm × 1.00 µm یا معادل

GC

inlet 220 °C؛ ستون flow 1 mL/min؛ split 5:1؛ oven: 40 °C (0.5 min) → 20 °C/min → 160 °C → 10 °C/min → 240 °C (2 min)؛ run time 16.5 min

Headspace

oven 130 °C، loop 180 °C، transfer line 185 °C؛ equilibration 15 min؛ ویال 20 mL؛ loop 1 mL؛ injection 1.0 min

MS

EI، SIM؛ منبع 230 °C، quad 150 °C؛ solvent delay 3.0 min؛ یون‌ها m/z 74 و m/z 102؛ dwell 150 ms

Diluent

N-methyl-2-pyrrolidone (NMP) درجه‌ی GC؛ blank = 5 mL NMP در ویال 20 mL

Sample prep

drug substance: 500 mg + 5 mL NMP، vortex؛ قرص: حداقل 300 mg API (تقریباً یک قرص 1 g) + 5 mL NMP، shake یا vortex

Calibration

دو منحنی: 0.025 تا 0.5 µg و 0.025 تا 100 µg در ویال؛ R ≥ 0.995

LOD / LOQ

LOD (S/N ≥ 3): NDMA برابر 0.005 ppm و NDEA برابر 0.02 ppm؛ LOQ: NDMA برابر 0.10 ppm و NDEA برابر 0.05 ppm (recovery 80 تا 120٪، RSD ≤ 10٪)

این روش برای والسارتان نوشته و validate شده است. برای داروی دیگر ممکن است ماتریس، دمای headspace و حتی تکنیک (مثلاً LC-MS) فرق کند؛ سند مربوط به همان محصول را از FDA یا مرجع دارویی خود بگیرید.

Analytes

18 ترکیب: PFBS، PFHxA، HFPO-DA، PFHxS، ADONA، PFHpA، PFOA، PFOS، PFNA، 9Cl-PF3ONS، PFDA، PFUnA، NEtFOSAA، 11Cl-PF3OUdS، NMeFOSAA، PFDoA، PFTrDA و PFTA

نمونه‌برداری

بطری polypropylene 250 mL با درپوش polypropylene و Trizma به‌عنوان نگه‌دارنده؛ دما حداکثر 10 °C در 48 ساعت اول و حداکثر 6 °C در آزمایشگاه (بدون انجماد)

Extraction

SPE با sorbent از نوع polystyrenedivinylbenzene (SDVB)؛ حجم نمونه 250 mL؛ عصاره‌ی نهایی در methanol/water با نسبت 96:4

Holding time

extraction در 14 روز؛ تحلیل عصاره حداکثر 28 روز پس از extraction

ستون (مثال Biotage)

C18، 5 µm، 50 × 2.1 mm (Restek Raptor C18) همراه با ستون delay برای جذب PFAS آمده از خود سیستم LC

Mobile phase (مثال)

A: 20 mM ammonium acetate در آب؛ B: methanol؛ gradient

LC (مثال)

0.6 mL/min · 35 °C · تزریق 10 µL

MS

ESI منفی، triple quadrupole در MRM (در مثال: AB SCIEX Triple Quad 5500)

Isotope standards (مثال)

¹³C₂-PFOA، ¹³C₄-PFOS و d₃-NMeFOSAA

نسبت‌های gradient و پارامترهای MS مثال سازنده هستند و برای هر دستگاه بهینه می‌شوند. در PFAS، از قطعات PTFE و بطری شیشه‌ای تا حد ممکن پرهیز کنید تا blank آلوده نشود. برای لیست بلندتر و ترکیب‌های short-chain، Method 533 (ایزوتوپ-دایلوشن) مکمل 537.1 است.

Analytes

caffeine، sodium benzoate، potassium sorbate، acesulfame K، aspartame، saccharin (و degradation peaks آسپارتام)

ستون

XBridge BEH Phenyl XP، 130 Å، 4.6 × 150 mm، 2.5 µm

Mobile phase

isocratic با mobile phase آماده‌ی Waters Beverage (ترکیب آن اعلام نشده و بر پایه‌ی ethanol است)

Flow / temperature

1.6 mL/min · 35 °C

Detection

UV در 214 nm

Injection / run

7 µL در متد (5 µL برای نوشیدنی‌ها، 2 µL برای energy drink) · run time 17 min

Sample prep

2 min sonication و filtration با فیلتر 0.2 µm PVDF

Standard

benzoate 200 mg/L، sorbate 100 mg/L، caffeine 100 mg/L، acesulfame K 150 mg/L، saccharin 100 mg/L؛ aspartame از پودر

critical pair در این متد یک unknown peak و acesulfame K است با USP resolution برابر 2.3. mobile phase اختصاصی است؛ برای ستون و mobile phase دیگر (مثل C18 و acetate buffer) باید متد جدید توسعه و validate شود.

Analytes

16 PAH: naphthalene، acenaphthylene، acenaphthene، fluorene، phenanthrene، anthracene، fluoranthene، pyrene، benzo[a]anthracene، chrysene، benzo[b]fluoranthene، benzo[k]fluoranthene، benzo[a]pyrene، dibenzo[a,h]anthracene، benzo[ghi]perylene، indeno[1,2,3-cd]pyrene

ستون

HC-ODS Sil-X، 5 µm، 250 × 2.6 mm

Gradient

isocratic 5 min با acetonitrile/water برابر 40:60، سپس linear تا 100٪ acetonitrile در 25 min

Flow

0.5 mL/min (برای ID دیگر: linear velocity حدود 2 mm/s)

Detectors

UV در 254 nm و FLD با excitation در 280 nm و emission بالاتر از 389 nm؛ استفاده از یکی یا هر دو مجاز است

Injection

2 تا 5 µL

Extraction

آب: methylene chloride با روش 3510 یا 3520؛ جامد: 3540 یا 3550؛ solvent exchange به acetonitrile

Holding time

extract تا 40 روز در یخچال

ستون این متد قدیمی است. امروز ستون C18 مخصوص PAH با ID 4.6 mm و flow متناسب (مثلاً 1.0 mL/min) رایج است و باید مجدداً validate شود.

Cleanup

ستون immunoaffinity (IAC) پس از extraction با methanol یا acetonitrile بسته به matrix

ستون

C18، 150 × 4.6 mm با ستون guard

Mobile phase

isocratic: water/acetonitrile/methanol (نسبت طبق application note: 60/15/30)

Flow / temperature

1.2 mL/min · 36 °C

Derivatization

post-ستون photochemical (UVE) با 254 nm و reactor 1 mL، بدون reagent

Fluorescence

excitation 365 nm · emission 460 nm

Injection

10 تا 100 µL

Elution order

G2 (5.0) · G1 (5.8) · B2 (6.6) · B1 (7.7) min

فقط B1 و G1 به derivatization نیاز دارند؛ B2 و G2 خودشان fluoresce می‌کنند و derivatization پاسخ B1 و G1 را حدود 30 برابر می‌کند. مجموع نسبت‌های mobile phase در منبع 105 است؛ پیش از استفاده آن را با متن استاندارد یا مرجع سازنده تطبیق دهید. LOD این application note «در حد ppt پایین» اعلام شده است.

Sample prep

2 mL شیر؛ گرم‌کردن در water bath، همزدن، centrifuge، دورریختن لایه‌ی چربی و filter کردن شیر چربی‌گیری‌شده

Cleanup

ستون immunoaffinity (Afla-M1)؛ wash با مخلوط water/methanol و elution با methanol

ستون

ACQUITY UPLC HSS T3، 1.8 µm، 2.1 × 100 mm

Mobile phase

isocratic: water 68٪ · acetonitrile 24٪ · methanol 8٪

Flow / temperature

0.4 mL/min · 25 °C

Injection

10 µL · run time 3.5 min

Fluorescence

excitation 360 nm · emission 440 nm

Calibration

0.005 تا 2.0 ng/mL، 4 نقطه، r² برابر 0.9995

Performance

LOD و LOQ حدود 0.005 µg/kg؛ recovery 80 تا 114٪

حد EU برای AFM1 در شیر 0.05 µg/kg و حد Codex 0.5 µg/kg است. متد روی دستگاه UPLC معرفی شده؛ برای HPLC معمولی باید ستون و flow تطبیق داده شود.

ستون

Aminex HPX-87H، 300 × 7.8 mm؛ resin 8٪ cross-linked به شکل H⁺، 9 µm، pH مجاز 1 تا 3

Mobile phase

5 mM sulfuric acid، isocratic

Flow

0.60 mL/min

Temperature

50 °C در مثال Bulletin؛ دما را مطابق متد خود بهینه کنید

Detection

UV در 210 nm و/یا RI

Elution order (مثال)

maltotriose، maltose، citric acid، tartaric acid، glucose، fructose، succinic acid، lactic acid، glycerol، acetic acid، pyroglutamic acid، methanol، ethanol

با این ستون جداسازی عمدتاً بر اساس ion-exclusion (با برهم‌کنش‌های ثانویه) انجام می‌شود، نه reversed-phase؛ از mobile phase آلی بالا و pH بالاتر از 3 استفاده نکنید.

Part A analytes

fluoride، chloride، nitrite، bromide، nitrate، ortho-phosphate، sulfate

Part B analytes

bromate، bromide، chlorate، chlorite

ستون guard و separator

Dionex AG9-HC و AS9-HC، 2 mm (یا معادل)؛ ستون 4 mm اختیاری

Eluent

9.0 mM Na₂CO₃ (1.91 g در 2 L آب)، purge با helium به‌مدت 10 min

Flow

0.40 mL/min برای ستون 2 mm (1.25 mL/min برای 4 mm)

Detector

suppressed conductivity با suppressor الکترولیتی (ASRS)

Loop

10 µL برای Part A؛ 50 µL برای Part B (ستون 2 mm)

MDL (mg/L)

fluoride 0.009 · chloride 0.004 · nitrite-N 0.001 · bromide 0.014 · nitrate-N 0.008 · phosphate-P 0.019 · sulfate 0.019

Preservation

nitrite، nitrate و phosphate: 4 °C و حداکثر 48 h؛ chloride، bromide و fluoride: 28 روز

baseline: مجموع drift و noise نباید بیش از 5 nS/min بالاتر از background conductivity باشد. برای bromate و chlorite از EDA برای preservation استفاده می‌شود.

Apparatus

Apparatus 1 (basket) یا Apparatus 2 (paddle)؛ سرعت و medium از monograph می‌آید

Temperature

medium در 37 °C با تلورانس ±0.5 °C

Measurement

absorbance نمونه‌ی صاف‌شده در λmax و مقایسه با standard؛ cuvette کوارتز برای ناحیه‌ی UV

Blank

medium بدون analyte، و در صورت لزوم placebo برای بررسی تداخل excipient

Acceptance

Q و stage testing طبق monograph

مقادیر دقیق (rpm، medium، volume، sampling time، Q) در هر monograph متفاوت است و باید از آن برداشته شود. این کارت فقط چارچوب کلی را می‌دهد و از متن رسمی کپی نشده است.

هدف

اثبات این‌که دستگاه برای آزمون‌های دارویی قابل اتکاست: دقت طول موج، دقت absorbance، stray light و resolution

کنترل طول موج

holmium در محلول perchloric acid یا holmium oxide glass filter: 200 تا 400 nm با خطای ±1 nm، 400 تا 780 nm با ±2 nm؛ انحراف معیار ≤ 0.5 nm؛ خط انتشار xenon در 541.9 nm هم می‌تواند به‌کار رود

کنترل absorbance (UV)

potassium dichromate در 200 تا 400 nm: زیر 1 Abs (حدود 20 تا 60 mg/L) دقت ±0.010 Abs؛ بالای 1 Abs (80 تا 100 mg/L) دقت ±1.0٪

کنترل absorbance (مرئی)

potassium dichromate حدود 600 mg/L یا neutral density filter؛ دقت ±0.010 Abs (برای filter تا ±0.008 Abs زیر 1 Abs)

Stray light

محلول cut-off باید Amax ≥ 2.0 (یا %T کمتر از 1٪) بدهد: KCl با 12 g/L در 198 nm؛ NaI با 10 g/L در 220 nm؛ acetone در 320 nm؛ NaNO₂ با 50 g/L در 370 nm

Resolution

toluene در hexane با 0.02% v/v (درجه‌ی UV)، اسکن 265 تا 275 nm؛ نسبت absorbance در 269 nm به 266 nm در USP برابر یا بیشتر از 1.3

تکرار

حداقل 6 اندازه‌گیری تکراری برای طول موج و absorbance؛ میانگین و انحراف معیار گزارش می‌شود

اعداد این کارت از خلاصه‌ی Agilent درباره‌ی USP 857 گرفته شده‌اند. معیار photometric linearity، noise و baseline flatness و معیار Ph. Eur. ممکن است متفاوت باشد؛ متن رسمی آخرین ویرایش را مرجع قرار دهید. استانداردهای مرجع باید certified باشند.

Principle

Cr(VI) محلول با diphenylcarbazide در محیط اسیدی رنگ قرمز-بنفش می‌دهد؛ absorbance در 540 nm اندازه‌گیری می‌شود

Scope و range

Cr(VI) محلول در عصاره‌های EP/TCLP و آب زیرزمینی؛ محدوده‌ی کاری 0.5 تا 50 mg Cr(VI) در لیتر

دستگاه

اسپکتروفتومتر در 540 nm با cell حداقل 1 cm، یا فتومتر با فیلتر سبز-زرد

Reagentها

diphenylcarbazide: 250 mg در 50 mL acetone (بطری قهوه‌ای)؛ H₂SO₄ ده درصد حجمی؛ استاندارد K₂Cr₂O₇ (141.4 mg در یک لیتر = 50 µg Cr در mL)

رنگ‌سازی

95 mL عصاره + 2.0 mL diphenylcarbazide؛ تنظیم pH روی 2 ± 0.5 با H₂SO₄؛ رساندن به 100 mL؛ 5 تا 10 min صبر

Calibration

استانداردهای 0.5 تا 5 mg/L که همان مراحل نمونه را طی می‌کنند؛ کسر reagent blank و turbidity blank

QC

matrix spike با بازیابی 85 تا 115٪؛ check standard مستقل هر 15 نمونه؛ blank در هر batch؛ replicate یا spike به‌ازای هر 10 نمونه

تداخل

vanadium تا 10 برابر غلظت Cr قابل تحمل است؛ Mo(VI) و Hg تا 200 mg/L؛ آهن بالاتر از 1 mg/L ممکن است رنگ زرد بدهد

نگهداری نمونه

4 °C و حداکثر 24 ساعت پس از extraction

اگر spike recovery در عصاره‌ی اسیدی کمتر از 85٪ باشد، وجود reducing agent باقی‌مانده را بررسی کنید (تنظیم pH روی 8.0 تا 8.5 و spike مجدد طبق متن روش). اگر تداخل پایدار ماند، روش‌های 7195 یا 7197 در متن EPA پیشنهاد شده‌اند.

Principle

نیترات در ناحیه‌ی UV و در حدود 220 nm جذب دارد. جذب مواد آلی در 275 nm هم اندازه‌گیری می‌شود تا سهم آن‌ها در 220 nm اصلاح شود

Scope

روش screening برای آب‌های تمیز و کم‌مواد‌آلی

Range

0.2 تا 11 mg NO₃⁻-N/L

Cell

cuvette کوارتز (در UV شیشه مناسب نیست)

Sample

نمونه‌ی کدر باید صاف شود (فیلتر را از نظر آلودگی نیترات آزمایش کنید)؛ بدون اسیدی‌کردن تا 48 ساعت در دمای کمتر از 6 °C بدون انجماد؛ برای نگهداری طولانی‌تر pH را با اسید به کمتر از 2 برسانید

در نمونه‌های دارای مواد آلی زیاد، سورفکتانت، یا کروم (VI) این روش دچار خطا می‌شود و باید از روش‌های دیگر (مثل IC طبق EPA 300.1 یا روش‌های رنگ‌سنجی) استفاده کنید. شرح روش در متن رسمی Standard Methods آمده است و اینجا فقط خلاصه است.